Die pathologische Proteinurie ist eines der wichtigsten und dauerhaftesten Anzeichen von Erkrankungen der Nieren und Harnwege. Die Bestimmung der Proteinkonzentration im Urin ist ein wesentlicher und wichtiger Bestandteil der Urintests. Die Identifizierung und quantitative Bewertung der Proteinurie ist nicht nur für die Diagnose vieler primärer und sekundärer Nierenerkrankungen wichtig. Die Beurteilung der Schwere der Proteinurie in der Dynamik enthält Informationen über den Verlauf des pathologischen Prozesses, über die Wirksamkeit der Behandlung. Der Nachweis von Protein im Urin, auch in Spuren, sollte alarmierend sein für mögliche Nierenerkrankungen oder Harnwege und erfordert eine erneute Analyse. Besonders hervorzuheben ist die Sinnlosigkeit der Urinforschung und insbesondere die Bestimmung des Urinproteins, ohne dabei alle Regeln für die Entnahme einzuhalten.

Alle Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin lassen sich in folgende Kategorien einteilen:

• Qualität,
• Semi-quantitativ
• Quantitativ.

Qualitative Methoden

Alle hochwertigen Urinproteinproben basieren auf der Fähigkeit von Proteinen, unter dem Einfluss verschiedener physikalischer und chemischer Faktoren zu denaturieren. Bei Vorhandensein von Protein in der Urinprobe kommt es entweder zu einer Trübung oder zum Verlust von flockendem Sediment.

Bedingungen zur Bestimmung des Proteins im Urin basierend auf der Gerinnungsreaktion:

1. Urin sollte sauer sein. Der alkalische Urin wird mit mehreren (2–3) Tropfen Essigsäure (5–10%) angesäuert.
2. Urin sollte klar sein. Die Trübung wird durch einen Papierfilter beseitigt. Wenn die Trübung nicht verschwindet, fügen Sie Talkum oder gebrannte Magnesia hinzu (etwa 1 Teelöffel pro 100 ml Urin), schütteln und filtern.
3. Der qualitative Test sollte in zwei Röhrchen durchgeführt werden, eines davon - der Kontrolle.
4. Die Suche nach Trübungen sollte sich im Durchlicht auf schwarzem Hintergrund befinden.

Zu den qualitativen Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin gehören:

Zahlreiche Studien belegen, dass mit keiner der bekannten Methoden zur qualitativen Bestimmung von Eiweiß im Urin zuverlässige und reproduzierbare Ergebnisse erzielt werden können. Trotzdem werden diese Methoden in den meisten CDL in Russland häufig als Screening eingesetzt - im Urin mit einer positiven qualitativen Reaktion wird die Proteinquantifizierung weiter durchgeführt. Von den qualitativen Reaktionen werden häufiger ein Geller-Test und eine Probe mit Sulfosalicylsäure verwendet, eine Probe mit Sulfosalicylsäure wird jedoch meist als die geeignetste Methode zum Nachweis pathologischer Proteinurie angesehen. Der Kochtest wird derzeit wegen seiner Mühsamkeit und Dauer praktisch nicht angewendet.

Semiquantitative Methoden

Die Brandberg-Roberts-Stolnikov-Methode basiert auf dem Geller-Ring-Test, daher werden bei dieser Methode dieselben Fehler wie beim Geller-Test beobachtet.

Derzeit werden Diagnosestreifen zunehmend zur Bestimmung von Urinprotein eingesetzt. Bei der semi-quantitativen Bestimmung von Protein im Harn auf einem Streifen ist Bromophenolblau in Citratpuffer der am häufigsten verwendete Farbstoff. Der Proteingehalt im Urin wird anhand der Intensität der blaugrünen Farbe beurteilt, die sich bei Kontakt der Reaktionszone mit Urin entwickelt. Das Ergebnis wird visuell oder mit Urinanalysatoren bewertet. Trotz der großen Beliebtheit und offensichtlichen Vorteile der Trockenchemie (Einfachheit, Analysegeschwindigkeit) sind diese Methoden der Urinanalyse im Allgemeinen und die Proteinbestimmung im Besonderen nicht ohne gravierende Mängel. Eine davon, die zu einer Verzerrung der diagnostischen Informationen führt, ist die höhere Empfindlichkeit des Bromphenolblau-Indikators gegenüber Albumin im Vergleich zu anderen Proteinen. In dieser Hinsicht sind die Teststreifen hauptsächlich für den Nachweis selektiver glomerulärer Proteinurie geeignet, wenn fast alles Urinprotein durch Albumin repräsentiert wird. Mit dem Fortschreiten der Veränderungen und dem Übergang von selektiver glomerulärer Proteinurie zu nichtselektiv (das Auftreten von Globulinen im Urin) werden die Ergebnisse der Proteinbestimmung im Vergleich zu den wahren Werten unterschätzt. Diese Tatsache macht es unmöglich, diese Methode zur Bestimmung von Protein im Urin zu verwenden, um den Zustand der Nieren (Glomerularfilter) über die Zeit zu bestimmen. Bei der tubulären Proteinurie werden auch die Ergebnisse der Proteinbestimmung unterschätzt. Die Bestimmung von Protein mittels Diagnosestreifen ist kein verlässlicher Indikator für niedrige Proteinuriewerte (die meisten der derzeit verfügbaren Diagnosestreifen können Protein mit einer Konzentration von weniger als 0,15 g / l nicht im Urin auffangen). Negative Ergebnisse der Proteinbestimmung an Streifen schließen das Vorhandensein von Globulinen, Hämoglobin, Uromucoid, Bens-Jones-Protein und anderen Paraproteinen im Urin nicht aus.

Schleimflocken mit einem hohen Gehalt an Glykoproteinen (z. B. bei entzündlichen Prozessen im Harntrakt, Pyurie, Bakteriurie) können sich auf der Indikatorzone des Streifens festsetzen und zu falsch positiven Ergebnissen führen. Falsch positive Ergebnisse können auch mit einer hohen Harnstoffkonzentration verbunden sein. Schlechte Beleuchtung und schlechte Farbwahrnehmung können zu ungenauen Ergebnissen führen.

In dieser Hinsicht sollte die Verwendung von Diagnosestreifen auf Screening-Verfahren beschränkt sein, und die mit ihrer Hilfe erzielten Ergebnisse sollten nur als Richtwerte angesehen werden.

Quantitative Methoden

Die korrekte quantitative Bestimmung von Protein im Urin ist in manchen Fällen keine leichte Aufgabe. Die Schwierigkeiten seiner Lösung werden von folgenden Faktoren bestimmt:

• niedriger Proteingehalt im Urin einer gesunden Person, oft an der Empfindlichkeitsschwelle der meisten bekannten Methoden;
• das Vorhandensein vieler Verbindungen im Urin, die den Verlauf chemischer Reaktionen stören können;
• Erhebliche Schwankungen des Inhalts und der Zusammensetzung von Urinproteinen bei verschiedenen Erkrankungen, die die Auswahl eines geeigneten Kalibrierungsmaterials erschweren.

In klinischen Laboren werden überwiegend sogenannte Routineverfahren zur Bestimmung von Eiweiß im Urin eingesetzt, die jedoch nicht immer zufriedenstellende Ergebnisse liefern.

Aus der Sicht eines im Labor arbeitenden spezialisierten Analytikers muss die zur quantitativen Bestimmung von Urinprotein bestimmte Methode folgende Anforderungen erfüllen:

• eine lineare Beziehung zwischen der Absorption des während der chemischen Reaktion gebildeten Komplexes und dem Proteingehalt in der Probe in einem weiten Konzentrationsbereich haben, wodurch zusätzliche Vorgänge bei der Vorbereitung der Probe für die Studie vermieden werden;
• sollte einfach sein, erfordert nicht den hochqualifizierten Darsteller, wird mit einer geringen Anzahl von Operationen ausgeführt;
• eine hohe Empfindlichkeit und analytische Zuverlässigkeit haben, wenn kleine Mengen des untersuchten Materials verwendet werden;
• resistent gegen verschiedene Faktoren sein (Variationen in der Probenzusammensetzung, das Vorhandensein von Arzneimitteln usw.)
• akzeptable Kosten haben;
• leicht an automatische Analysegeräte anpassbar sein;
• Das Ergebnis der Bestimmung sollte nicht von der Proteinzusammensetzung der Urinprobe abhängen.

Keines der derzeit bekannten Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Protein im Urin kann den "Goldstandard" uneingeschränkt behaupten.

Quantitative Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin lassen sich in turbidimetrisch und colorimetrisch unterteilen.

Turbidimetrische Methoden

Turbidimetrische Methoden umfassen:

• Proteinbestimmung mit Sulfosalicylsäure (SSC),
• Proteinbestimmung mit Trichloressigsäure (THC),
• Proteinbestimmung mit Benzethoniumchlorid.

Turbidimetrische Verfahren basieren auf der Verringerung der Löslichkeit von Urinproteinen aufgrund der Bildung einer Suspension von suspendierten Partikeln unter dem Einfluss von Ausfällungsmitteln. Der Proteingehalt in der Testprobe wird entweder durch die Intensität der Lichtstreuung, bestimmt durch die Anzahl der Lichtstreuteilchen (nephelometrisches Analyseverfahren) oder durch Abschwächung des Lichtflusses durch die resultierende Suspension (turbidimetrisches Analyseverfahren) beurteilt.

Die Stärke der Lichtstreuung bei Fällungsmethoden zum Nachweis von Protein im Urin hängt von vielen Faktoren ab: Mischgeschwindigkeit der Reagenzien, Temperatur des Reaktionsgemisches, pH-Wert des Mediums, Anwesenheit von Fremdverbindungen, Photometriemethoden. Die sorgfältige Einhaltung der Reaktionsbedingungen trägt zur Bildung einer stabilen Suspension mit konstanter Teilchengröße bei und erzielt relativ reproduzierbare Ergebnisse.

Einige Arzneimittel beeinflussen die Ergebnisse turbidimetrischer Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin und führen zu sogenannten "falsch positiven" oder "falsch negativen" Ergebnissen. Dazu gehören einige Antibiotika (Benzylpenicillin, Cloxacillin usw.), strahlenundurchlässige jodhaltige Substanzen und Sulfapräparate.

Turbidimetrische Verfahren sind schlecht standardisiert und führen häufig zu fehlerhaften Ergebnissen. Trotzdem werden sie in Laboratorien aufgrund der geringen Kosten und Verfügbarkeit von Reagenzien heute weit verbreitet eingesetzt. Die in Russland am weitesten verbreitete Methode ist die Proteinbestimmung mit Sulfosalicylsäure.

Kolorimetrische Methoden

Die empfindlichsten und genauesten sind kolorimetrische Methoden zur Bestimmung des Gesamtproteins im Urin, basierend auf spezifischen Farbproteinreaktionen.

Dazu gehören:

1. Biuret-Reaktion,
2. Lowry-Methode
3. Methoden basierend auf der Fähigkeit verschiedener Farbstoffe, mit Proteinen Komplexe zu bilden:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallolrot

Aus Sicht des Darstellers ist die Biuret-Methode in der täglichen Arbeit des Labors mit einem großen Forschungsfluss aufgrund der großen Anzahl von Operationen unbequem. Gleichzeitig zeichnet sich das Verfahren durch eine hohe analytische Zuverlässigkeit aus, ermöglicht die Bestimmung von Protein in einem breiten Konzentrationsbereich und den Nachweis von Albumin, Globulinen und Paraproteinen mit vergleichbarer Empfindlichkeit, wodurch die Biuret-Methode als Referenz betrachtet wird und zum Vergleich anderer Analyseverfahren zum Nachweis von Protein im Urin empfohlen wird. Das Biuret-Verfahren zur Bestimmung des Proteins im Urin wird vorzugsweise in Laboratorien der Nephrologischen Abteilungen durchgeführt und in Fällen angewendet, in denen die Ergebnisse der Bestimmung mit anderen Methoden fragwürdig sind, sowie zur Bestimmung des täglichen Proteinverlusts bei nephrologischen Patienten.

Die Lowry-Methode, die eine höhere Empfindlichkeit als die Biuret-Methode aufweist, kombiniert die Biuret-Reaktion und die Folin-Reaktion mit den Aminosäuren Tyrosin und Tryptophan im Proteinmolekül. Trotz der hohen Empfindlichkeit liefert diese Methode nicht immer verlässliche Ergebnisse bei der Bestimmung des Proteingehalts im Urin. Der Grund dafür ist die unspezifische Wechselwirkung von Folins Reagenz mit Nichtproteinkomponenten des Harns (meistens Aminosäuren, Harnsäure, Kohlenhydrate). Die Trennung dieser und anderer Urinkomponenten durch Dialyse oder Proteinfällung ermöglicht es, dieses Verfahren erfolgreich zur quantitativen Bestimmung von Urinprotein einzusetzen. Einige Arzneimittel - Salicylate, Chlorpromazin, Tetracycline - können diese Methode beeinflussen und die Ergebnisse der Studie verzerren.

Ausreichende Empfindlichkeit, gute Reproduzierbarkeit und leichte Bestimmung des Proteins durch Bindung von Farbstoffen machen diese Verfahren vielversprechend, aber die hohen Kosten für Reagenzien verhindern ihre breitere Verwendung in Laboratorien. Derzeit wird die Pyrogallolrot-Methode in Russland immer häufiger.

Bei der Durchführung einer Studie über das Niveau der Proteinurie muss berücksichtigt werden, dass verschiedene Methoden zur Bestimmung der Proteinurie eine unterschiedliche Empfindlichkeit und Spezifität gegenüber zahlreichen Urinproteinen aufweisen.

Basierend auf den empirischen Daten wird empfohlen, das Protein mit zwei verschiedenen Methoden zu bestimmen und den wahren Wert anhand einer der folgenden Formeln zu berechnen:

Proteinurie = 0,4799 B + 0,5230 L;
Proteinurie = 1,5484 B - 0,4825 S;
Proteinurie = 0,2167 S + 0,7579 L;
Proteinurie = 1,0748 P - 0,0986 B;
Proteinurie = 1,0104 P - 0,0289 S;
Proteinurie = 0,8959 P + 0,0845 L;

wo:
B - Messergebnis mit Coomassie G-250;
L ist das Messergebnis mit dem Reagens von Lowry;
P - Messergebnis mit Pyrogallolmolybdat;
S ist das Messergebnis mit Sulfosalicylsäure.

Angesichts der ausgeprägten Schwankungen des Proteinurienniveaus zu verschiedenen Tageszeiten sowie der Abhängigkeit der Urinproteinkonzentration von der Diurese und seines unterschiedlichen Gehalts in den einzelnen Urinanteilen ist es heute üblich, dass die Nierenpathologie die Schwere der Proteinurie durch den täglichen Proteinverlust im Urin beurteilt, dh den so genannten Proteinanteil tägliche Proteinurie. Es wird in g / Tag ausgedrückt.

Wenn es nicht möglich ist, täglich Urin zu sammeln, wird empfohlen, die Protein- und Kreatininkonzentration in einer einzigen Portion Urin zu bestimmen. Da die Rate der Kreatininfreisetzung während des Tages ziemlich konstant ist und nicht von Änderungen der Uriniergeschwindigkeit abhängt, ist das Verhältnis der Proteinkonzentration zur Kreatininkonzentration konstant. Dieses Verhältnis korreliert gut mit der täglichen Proteinausscheidung und kann daher zur Beurteilung der Schwere der Proteinurie herangezogen werden. Das normale Protein / Kreatinin-Verhältnis sollte unter 0,2 liegen. Protein und Kreatinin werden in g / l gemessen. Ein wichtiger Vorteil des Verfahrens zur Beurteilung der Schwere der Proteinurie durch das Verhältnis von Protein-Kreatinin ist die vollständige Beseitigung von Fehlern, die mit der Unfähigkeit oder unvollständigen Sammlung von täglichem Urin zusammenhängen.

Literatur:

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Derzeit werden Diagnosestreifen zunehmend zur Bestimmung von Urinprotein eingesetzt. Bei der semi-quantitativen Bestimmung von Protein im Harn auf einem Streifen ist Bromophenolblau in Citratpuffer der am häufigsten verwendete Farbstoff. Der Proteingehalt im Urin wird anhand der Intensität der blaugrünen Farbe beurteilt, die sich bei Kontakt der Reaktionszone mit Urin entwickelt.

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Methoden zur Bestimmung von Eiweiß im Urin

Eine geringe Menge an Protein im Tagesurin findet sich auch bei völlig gesunden Individuen. Solche geringen Konzentrationen werden jedoch mit den derzeit verwendeten Methoden nicht in Einzelportionen nachgewiesen. Etwa 70% der Urinproteine ​​eines gesunden Menschen machen Uromucoid aus, ein Protein, das ein Produkt des Nierengewebes ist; Daher ist der Anteil des glomerulären Proteins im Urin gesunder Menschen vernachlässigbar und die Proteinurie beträgt normalerweise 50–150 mg / Tag, wobei die meisten Urinproteine ​​mit der Molke identisch sind.

Es wird angenommen, dass die folgenden Formen der Proteinurie je nach Herkunftsort unterschieden werden können: prerenal, verbunden mit einem verstärkten Abbau von Gewebeprotein, schwerer Hämolyse; Nieren, aufgrund der Pathologie der Nieren, die in glomeruläre und tubuläre unterteilt werden kann; postrenal, assoziiert mit der Pathologie des Harntrakts und meistens durch entzündliche Exsudation verursacht.

Abhängig von der Dauer des Daseins emittieren sie eine persistierende Proteinurie, die über viele Wochen und sogar Jahre besteht und vorübergehend ist und periodisch auftritt, manchmal sogar in Abwesenheit einer Nierenerkrankung, beispielsweise mit Fieber und schwerer Intoxikation. Es ist ratsam, zwischen der Variabilität der Proteinurie zu unterscheiden: bei täglichem Proteinverlust bis 1 g - mäßig, 1 bis 3 g - mittel und mehr als 3 g - ausgeprägt.

Der Nachweis von Proteinen mit relativ hohem Molekulargewicht im Urin weist auf die Abwesenheit von Selektivität des Nierenfilters und dessen ausgeprägte Schädigung hin. Sprechen Sie in diesen Fällen über die geringe Selektivität der Proteinurie. Daher ist die Definition von Urinproteinfraktionen gegenwärtig weit verbreitet. Die genauesten Methoden sind die Elektrophorese in Stärke- und Polyacrylamidgelen.
Entsprechend den durch diese Verfahren erhaltenen Ergebnissen kann man die Selektivität der Proteinurie beurteilen.

Die meisten qualitativen und quantitativen Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin basieren auf seiner Koagulation im Volumen des Urins oder an der Grenzfläche zwischen den Medien (Urin und Säure); Wenn es eine Möglichkeit gibt, die Intensität der Koagulation zu messen, wird die Probe quantitativ.

Einheitlicher Sulfosalicylsäure-Test:

Erforderliches Reagenz:

20% ige Sulfosalicylsäurelösung.

Der Verlauf der Studie:

In 2 Reagenzgläser 3 ml filtrierten Urins einfüllen. Fügen Sie im Reagenzglas 6-8 Tropfen Reagenz hinzu. Vergleichen Sie auf einem dunklen Hintergrund das Kontrollrohr mit einem erfahrenen. Trübung im Reagenzglas zeigt das Vorhandensein von Protein an, die Probe gilt als positiv.

Wenn die Reaktion des Urins alkalisch ist, wird sie vor der Untersuchung mit 2 bis 3 Tropfen einer 10% igen wässrigen Essigsäurelösung angesäuert.

Brandberg-Roberts-Stolnikov vereinheitlichte Methode:

Die Methode basiert auf der Geller-Ringprobe, die darin besteht, dass an der Grenze von Salpetersäure und Urin in Gegenwart von Protein deren Koagulation auftritt und ein weißer Ring erscheint.

Erforderliches Reagenz:

30% ige Lösung von Salpetersäure (relative Dichte 1,2) oder Reagenz Larioninsäure.
Zubereitung des Reagenz Larion: 20-30 g Natriumchlorid werden durch Erhitzen in 100 ml destilliertem Wasser gelöst, abkühlen lassen und filtriert. Zu 99 ml des Filtrats wird 1 ml konzentrierte Salpetersäure gegossen.

Der Verlauf der Studie:

1-2 ml Salpetersäure (oder Larionsäure-Reagenz) werden in das Röhrchen gegossen und vorsichtig über die Röhrchenwand die gleiche Menge filtrierten Urins geschichtet. Das Auftreten eines dünnen weißen Rings an der Grenzfläche zweier Flüssigkeiten zwischen der 2. und 3. Minute zeigt das Vorhandensein von Protein bei einer Konzentration von etwa 0,033 g / l an. Wenn der Ring früher als 2 Minuten nach der Schichtung erscheint, sollte der Urin mit Wasser verdünnt und der bereits verdünnte Urin neu geschichtet werden. Der Verdünnungsgrad des Urins wird in Abhängigkeit vom Typ des Rings ausgewählt, d. H. Breite, Kompaktheit und Erscheinungszeit. Mit einem fadenförmigen Ring, der früher 2 Minuten auftrat, wird der Urin 2-fach verdünnt, mit einem breiten 4-fach, mit einem kompakten 1-8-mal usw. Die Proteinkonzentration wird durch Multiplikation von 0,033 mit der Verdünnungsrate berechnet und in Gramm pro 1 l (g / l) angegeben.

Manchmal wird ein weißer Ring erhalten, wenn große Mengen an Uraten vorhanden sind. Im Gegensatz zum Proteinring liegt der Urat etwas höher als die Grenze zwischen zwei Flüssigkeiten und löst sich bei leichter Erwärmung auf.

Quantitative Bestimmung des Proteins im Urin durch Trübung, gebildet durch Zugabe von Sulfosalicylsäure:

Das Prinzip der Methode:

Die Trübungsintensität während der Proteinkoagulation mit Sulfosalicylsäure ist ihrer Konzentration proportional.

Benötigte Reagenzien:

1. 3% ige Sulfosalicylsäurelösung.

2. 0,9% ige Natriumchloridlösung.

3. Standardalbuminlösung - 1% ige Lösung (1 ml Lösung, die 10 mg Albumin enthält): 1 g lyophilisiertes Albumin (aus humanem oder Rinderserum) wird in einer kleinen Menge 0,9% iger Natriumchloridlösung in einem Kolben mit einer Kapazität von 100 gelöst ml und wird dann mit derselben Lösung auf die Marke eingestellt. Das Reagenz wird durch Zugabe von 1 ml 5% iger Natriumazidlösung (NaN3) stabilisiert. Bei Lagerung im Kühlschrank ist das Reagenz 2 Monate gültig.

Sonderausstattung - photoelektrisches Kolorimeter.

Der Verlauf der Studie:

1,25 ml filtrierter Urin werden in ein Reagenzglas gegeben, mit 3% iger Sulfosalicylsäurelösung auf 5 ml aufgefüllt und gemischt. Nach 5 min werden sie mit einem photoelektrischen Kolorimeter bei einer Wellenlänge von 590–650 nm (Orangen- oder Rotlichtfilter) gegen eine Kontrolle in einer Zelle mit einer optischen Weglänge von 5 mm gemessen. Die Kontrolle ist ein Röhrchen, in dem 1,25 ml filtrierter Urin zu 5 ml 0,9% iger Natriumchloridlösung zugegeben wurden. Die Berechnung wird gemäß dem Kalibrierungsplan durchgeführt, für den Aufbau, aus dem Standardlösungen verdünnt werden, wie in der Tabelle angegeben.

Von jeder resultierenden Lösung werden 1,25 ml entnommen und als Versuchsproben behandelt.

Die geradlinige Abhängigkeit beim Erstellen einer Kalibrierungskurve wird bis zu 1 g / l gespeichert. Bei höheren Konzentrationen sollte die Probe verdünnt werden und die Verdünnung bei der Berechnung berücksichtigen.

Falsch positive Ergebnisse können erzielt werden, wenn Kontrastmittel im organischen Jod enthaltenden Urin enthalten sind. Daher kann der Test nicht bei Personen angewendet werden, die Jodpräparate einnehmen. Ein falsch positives Ergebnis kann auch auf Sulfanilamidpräparationen, hohe Penicillin-Dosen und hohe Konzentrationen im Harn der Harnsäure zurückzuführen sein.

Biuret-Methode:

Das Prinzip der Methode:

Die Peptidbindungen des Proteins mit Kupfersalzen in alkalischem C bilden einen violetten Komplex. Proteine ​​werden mit Trichloressigsäure vorgefällt.

Benötigte Reagenzien:

1. 10% ige Lösung von Trichloressigsäure.
2. 20% ige Kupferlösung (CuSO & sub4; ~ 5H & sub2; O).
3. 3% ige NaOH-Lösung.

Der Verlauf der Studie:

Zu 5 ml Urin, der aus der täglichen Menge entnommen wurde, 3 ml Trichloressigsäurelösung zugeben, die auf ein konstantes Sedimentvolumen zentrifugiert wurde. Der Überstand wird mit einer Pipette abgesaugt, der Niederschlag wird dann in 5 ml NaOH-Lösung gelöst. Die Lösung wird mit 0,25 ml CuSO 4 versetzt, gerührt und zentrifugiert. Der Überstand wird bei einer Wellenlänge von 540 nm in einer Küvette mit einer optischen Weglänge von 10 mm gegen destilliertes Wasser photometrisiert. Die Konzentration des Proteins wird aus der Kalibrierungskurve berechnet, während es aufgetragen wird, die Konzentration des Proteins (g / l) ist auf der y-Achse und die optische Dichte in Extinktionseinheiten auf der Abszissenachse aufgetragen. Basierend auf der erhaltenen Konzentration wird der tägliche Proteinverlust im Urin berechnet.

Indikatorpapier (Streifen) verwenden:

Protein kann mit Indikatorpapier (Streifen) nachgewiesen werden, die von Albuphan, Ames (England), Albustix, Boehringer (Deutschland), Comburtest usw. hergestellt werden.

Das Prinzip beruht auf dem Phänomen des sogenannten Proteinfehlers einiger Säure-Base-Indikatoren. Der Indikatorteil des Papiers ist mit Tetrabromphenolblau und Citratpuffer gesättigt. Wenn das Papier angefeuchtet ist, löst sich der Puffer auf und liefert den geeigneten pH-Wert für die Indikatorreaktion.

Bei 3,0-3,5 Aminogruppen reagieren Proteine ​​mit dem Indikator und ändern ihre ursprüngliche gelbe Farbe in ein grünliches Blau. Danach kann man die Proteinkonzentration im Urin im Vergleich zur Farbskala grob abschätzen. Die Hauptvoraussetzung für den korrekten Betrieb der Indikatorstreifen ist die Bereitstellung eines pH-Werts im Bereich von 3,0 bis 3,5, damit die Reaktion stattfinden kann.

Wenn das Papier länger als die in der Anleitung angegebene Exposition mit dem untersuchten Urin in Kontakt ist, löst sich der Citratpuffer darin auf, und der Indikator reagiert dann auf den wahren pH-Wert des Urins, d. gibt eine falsch positive Reaktion. Aufgrund der Tatsache, dass die Pufferkapazität begrenzt ist, werden falsch positive Ergebnisse erhalten, selbst wenn die Richtlinien in Proben mit zu alkalischem Urin (pH> 6,5) befolgt werden, und in Proben mit zu saurem Urin (pH 6,5) mit niedriger relativer Dichte Urin und bei einer geringen Konzentration von Bens-Jones-Protein.

Benötigte Reagenzien:

2 M Acetatpuffer, pH 4,9.

Der Verlauf der Studie:

Der filtrierte Urin in einer Menge von 4 ml wird mit 1 ml Puffer gemischt und 15 Minuten in einem Wasserbad bei einer Temperatur von 56 ° C erhitzt. In Gegenwart von Bens-Jones-Proteinen tritt innerhalb von 2 Minuten ein ausgeprägter Niederschlag auf. Wenn die Bens-Jones-Proteinkonzentration weniger als 3 g / l beträgt, kann die Probe negativ sein. In der Praxis ist dies äußerst selten, da die Konzentration des Bens-Jones-Proteins im Urin zum größten Teil signifikant ist.

Mit absoluter Sicherheit kann das Bens-Jones-Protein durch eine immunelektrophoretische Studie mit spezifischen Seren gegen die schweren und leichten Ketten von Immunglobulinen nachgewiesen werden.

Bestimmung der Albumose (Proteose):

Albumosen sind Produkte der Proteinspaltung, deren Prinzip darauf beruht, dass sie sich beim Kochen nicht falten, sondern eine positive Biuret-Reaktion zeigen und mit einigen Salzen ausgesalzen werden, insbesondere Ammoniumsulfat und Zinkacetat in einem sauren Medium.

Normaler Urin enthält keine Albumose. Spuren können im normalen Urin sein, wenn der Samen verunreinigt ist. In der Pathologie kann die Albumose im Urin bei fieberhaften Zuständen, Blut- und Plasmatransfusionen, der Resorption von Exsudaten und Transsudaten sowie dem Zerfall von Tumoren auftreten.

Benötigte Reagenzien:

1. Gesättigte Natriumchloridlösung.
2. Konzentrierte Natronlauge.
3. Eine schwache Lösung von Kupfersulfat (fast farblos).

Der Verlauf der Studie:

Der mit Essigsäure angesäuerte Urin wird mit einer gesättigten Natriumchloridlösung (1/3 Volumen) versetzt, gekocht und die heiße Flüssigkeit filtriert. Albumosen gehen in das Filtrat über, in dem ihre Anwesenheit durch eine Biuret-Reaktion bestimmt wird. Zum Filtrat werden 1/2 Volumen einer konzentrierten Natronlauge und einige Tropfen einer schwachen Kupfersulfatlösung zugegeben. Mit einer positiven Probe erhält man eine rotviolette Farbe.

Bei einem positiven Test mit Sulfosalicylsäure wird der Urin erhitzt. Wenn die Trübung nach dem Abkühlen verschwindet und wieder auftritt, bedeutet dies, dass der Urin Albumosen oder den Proteinkörper von Bens-Jones enthält.

Protein im Urin, Labortests

Methoden zur Bestimmung von Urinprotein

Für die Klinik kommt es sowohl auf die qualitative als auch auf die quantitative Bestimmung des Proteins im Urin an.

Qualitative Tests zur Bestimmung von Urinprotein
Vorgeschlagen wurden mehr als 100 Reaktionen zur qualitativen Bestimmung des Proteins im Urin. Die meisten von ihnen basieren auf der Proteinfällung durch physikalische (Erwärmung) oder chemische Mittel. Das Vorhandensein von Protein wird durch das Auftreten von Trübungen nachgewiesen.

Interessant sind auch kolorimetrische Trockenproben.

Nachfolgend wird nur das für die Praxis der Probe wichtigste beschrieben.

Sulfosalicylsäure-Test. Zu einigen Millilitern Urin fügen Sie 2-4 Tropfen einer 20% igen Lösung von Sulfosalicylsäure hinzu. Wenn eine positive Reaktion trübe erscheint. Das Ergebnis wird mit den Begriffen bezeichnet: Opaleszenz, eine schwach positive, positive oder stark positive Reaktion. Der Sulfosalicylsäure-Test ist eine der empfindlichsten Proben für die Eiweißbildung im Urin. Sie findet selbst den kleinsten anomalen Anstieg des Urinproteins. Dank einer einfachen Technik hat dieser Test breite Anwendung gefunden.

Testen Sie mit Aseptol. Aseptol ist ein Ersatz für Sulfosalicylsäure. Es kann aus Materialien hergestellt werden, die in jedem Labor verfügbar sind (Phenol und Schwefelsäure). Als Reagenz wird eine 20% ige Aseptollösung verwendet. Der Test wird wie folgt durchgeführt: In einem Reagenzglas mit 2-3 ml Urin werden 0,5-1-1 ml Aseptollösung zum Boden gegeben. Wenn sich an der Grenze zwischen zwei Flüssigkeiten ein weißer Ring aus koaguliertem Protein herausstellt, ist die Probe positiv.

Gellers Test. Unter einigen Millilitern Urin werden 1-2 ml 30% ige Salpetersäure (spezifisches Gewicht 1,20) gesalzen. Wenn an der Grenzfläche beider Flüssigkeiten ein weißer Ring entsteht, ist die Probe positiv. Die Reaktion wird positiv, wenn das Protein mehr als 3,3 mg% beträgt. Manchmal wird ein weißer Ring erhalten, wenn große Mengen an Uraten vorhanden sind. Im Gegensatz zum Proteinring erscheint der Uratring nicht an der Grenze zwischen den beiden Flüssigkeiten, sondern etwas höher. Larionova schlägt vor, anstelle von 30% Salpetersäure als Reagenz eine 1% ige Lösung von Salpetersäure in einer gesättigten Natriumchloridlösung zu verwenden; Dies führt zu großen Einsparungen bei Salpetersäure.

Probe mit Zhelezystosinerodistie Kalium und Essigsäure. Diese Reaktion ermöglicht die Isolierung von Serumproteinen aus Nukleoalbumin.

Gleiche Mengen Urin werden in zwei Röhrchen gegossen. In einem davon einige Tropfen einer 30% igen Essigsäurelösung zugeben. Wenn im Vergleich zum Kontrollröhrchen eine Trübung erhalten wird, enthält der Urin Nukleoalbumin. Wenn keine Trübung auftritt, wird der Inhalt beider Rohre gemischt und erneut in zwei Teile geteilt. Fügen Sie in einem der beiden Reagenzgläser einige Tropfen einer 10% igen Lösung des gelben Blutsalzes (Kaliumferrocyanidsirup) hinzu (ein Überschuss kann eine positive Probe in eine negative umwandeln). In Gegenwart von Molkeproteinen wird eine Trübung erhalten.

Bei konzentriertem Urin, der große Mengen an Harnsäure und Harnsäure enthält, sollte nach einer vorläufigen Verdünnung (2-3 Mal) des Urins mit Wasser eine Probe mit Eisen (III) - und Sirup-Kalium und Essigsäure durchgeführt werden. Andernfalls kann es zu Trübungen durch gefällte Harnsäure kommen.

Dies ist besonders wichtig bei der Untersuchung von Urin bei Säuglingen, die viel Harnsäure und Urate enthalten.

Von den übrigen qualitativen Proben für Protein im Urin, die auf Proteinpräzipitation beruhen, haben sie Anwendung gefunden: Kochtest, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia usw.

Bei der Herstellung hochwertiger Proben für Protein im Urin, die auf der Ablagerung von Proteinen beruhen, müssen die folgenden allgemeinen Regeln beachtet werden, deren Verletzung zu erheblichen Fehlern in der Studie führt.

1. Der zu testende Urin muss sauer sein. Bei einer alkalischen Reaktion wird der Urin mit Essigsäure leicht angesäuert. Die Herstellung einer Probe mit alkalischem Urin in Fällen, in denen eine Säure als Reagenz verwendet wird, kann zur Neutralisierung der Säure und zu einem negativen Ergebnis bei einer positiven Reaktion führen. Dies gilt insbesondere für den Sulfosalicylsäure-Test, da die Säure in sehr geringen Mengen zugegeben wird und leicht neutralisiert werden kann.

2. Der untersuchte Urin sollte transparent sein.

3. Proben zur Eiweißbildung im Urin sollten immer in zwei Röhrchen erfolgen, von denen eine als Kontrolle dient. Ohne ein Kontrollrohr kann eine leichte Trübung während der Reaktion nicht wahrgenommen werden.

4. Die Menge der zugesetzten Säure in den Proben sollte nicht zu groß sein. Eine große Menge an Säure kann zur Bildung von löslichem Acidolbumin und zur Umwandlung einer positiven Probe in eine negative führen.

Aufgrund ihrer einfachen Technik verdienen colorimetrische Trockenproben viel Aufmerksamkeit. Wenn diese Proben verwendet werden, die Wirkung, die Protein auf die Farbe des Indikators in der Pufferlösung hat (sogenannte Proteinfehlerindikatoren). Ein Filterpapier, das mit Citronensäurepuffer und Bromphenolblau als Indikator infundiert ist, wird für kurze Zeit vom Urin aufgenommen. Die Probe ist positiv, wenn sie blau-grün wird. Beim Vergleich der Farbintensität mit Farbpapierstandards lassen sich ungefähre und quantitative Aussagen ableiten. Indikatorpapier wird in Packungen mit entsprechenden Farbstandards wie Universalindikatorpapier verkauft.

Methoden zur quantitativen Bestimmung von Urinprotein
Es wurden viele Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Urinprotein vorgeschlagen. Genaue quantitative Verfahren zur Bestimmung von Proteinen in biologischem Material werden aufgrund komplexer und zeitaufwändiger Techniken bei der Bestimmung von Protein im Urin nicht weit verbreitet verwendet. Volumetrische Verfahren sind weit verbreitet, insbesondere das Esbach-Verfahren. Sie sind sehr einfach, aber leider nicht sehr genau. Die Methoden der Brandberg-Stolnikov-Gruppe, die mit einer relativ einfachen Technik genauere Ergebnisse als volumetrische Methoden liefern, sind auch für die Klinik geeignet. Bei Anwesenheit eines Photometers oder Nephelometers sind auch nephelometrische Verfahren zweckmäßig.

Esbach-Methode. Er wurde 1874 vom Pariser Arzt Esbach vorgeschlagen. Ein spezielles Röhrchen (Esbachs Albuminometer) wird mit Urin und Reagenz gefüllt. Das Röhrchen wird mit einem Gummistopfen verschlossen, gründlich gerührt (ohne zu schlagen!) Und bis zum nächsten Tag in aufrechter Position belassen. Berichten Sie die Teilung, die die Proteinniederschlagsäule erreicht. Die gefundene Zahl zeigt den Proteingehalt. Bei der Esbach-Methode ist es sehr wichtig, dass der Urin sauer ist. Alkalischer Urin kann die sauren Bestandteile des Reagens neutralisieren und die Ausfällung von Proteinen verhindern.

Vorteile der Methode: Sie ist in der Praxis einfach und praktisch.

Nachteile: Die Methode ist ungenau, das Ergebnis wird nach 24 - 48 Stunden erzielt.

Brandberg-Stolnikov-Methode. Es basiert auf dem Geller-Qualitätstest. Die Geller-Probe kann zur quantitativen Bestimmung verwendet werden, da sie mit einem Proteingehalt von über 3,3 mg% ein positives Ergebnis liefert. Dies ist die ultimative Proteinkonzentration, unterhalb derer die Probe negativ wird.

Modifikation von Ehrlich und Althausen. Die sowjetischen Wissenschaftler S. L. Ehrlich und A. Ya. Altgauzen modifizierten die Brandberg-Stolnikov-Methode, um die Möglichkeiten zur Vereinfachung der Forschung und zur Zeitersparnis bei der Herstellung aufzuzeigen.

Die erste Vereinfachung bezieht sich auf den Zeitpunkt des Erscheinens des Rings. Es wird genau der Zeitpunkt seines Auftretens bestimmt, ohne unbedingt an der 2. und 3. Minute festzuhalten.

Durch die zweite Vereinfachung kann festgestellt werden, welche Art der Zucht durchzuführen ist. Die Autoren haben bewiesen, dass die erforderliche Verdünnung durch die Art des erhaltenen Rings näherungsweise festgelegt werden kann. Sie unterscheiden sich filamentös, breit
und kompakter Ring.

Von den nephelometrischen Methoden verdient die Kingsberry- und Clark-Methode Beachtung. 2,5 ml filtrierter Urin wird in einen kleinen Meßzylinder gegossen, der mit 3% iger wäßriger Lösung von Sulfosalicylsäure auf 10 ml aufgefüllt wird. Gut umrühren und nach 5 Minuten in einer 1-cm-Küvette mit einem gelben Filter unter Verwendung von Wasser als Ausgleichsflüssigkeit photometerisieren. Mit dem Pulfrich-Photometer ergibt die gefundene Extinktion, multipliziert mit 2,5, die Proteinmenge in% o. Wenn der Extinktionsindex höher als 1,0 ist, wird der Urin 2-fach, 4-mal oder sogar mehr vorverdünnt.

Um eine klare Vorstellung von der Menge an im Urin ausgeschiedenen Proteinen zu erhalten, muss nicht nur die Konzentration in einer separaten Portion des Urins, sondern auch die tägliche Gesamtmenge bestimmt werden. Dazu den Urin des Patienten für 24 Stunden sammeln, sein Volumen in Milliliter messen und die Proteinkonzentration in einem Teil des täglichen Urins in g% bestimmen. Die Menge an Proteinen, die innerhalb von 24 Stunden im Urin ausgeschieden wird, wird in Abhängigkeit von der täglichen Urinmenge in Gramm bestimmt.

Die klinische Bedeutung des Proteins im Urin

Normalerweise enthält menschlicher Urin nur minimale Proteinmengen, die nicht durch normale Urinproteinproben ermittelt werden können. Ausscheidung großer Proteinmengen, bei denen gewöhnliche qualitativ hochwertige Proteinproben im Urin positiv werden - ein abnormales Phänomen, das als Proteinurie bezeichnet wird. Proteinurie ist nur beim Neugeborenen physiologisch, in den ersten 4-10 Tagen nach der Geburt. Der häufig verwendete Name Albuminurie ist falsch, da nicht nur Albumin, sondern auch andere Arten von Proteinen (Globuline usw.) im Urin ausgeschieden werden.

Proteinurie wurde als diagnostisches Symptom 1770 von Cotuno entdeckt.

Die wichtigste funktionelle Nierenproteinurie bei Kindern ist wie folgt:

1. Physiologische Proteinurie des Neugeborenen. Es kommt bei den meisten Neugeborenen vor und hat keine nachteilige Bedeutung. Dies wird durch einen unreifen Nierenfilter, Geburtsschäden oder Flüssigkeitsverlust in den ersten Lebenstagen erklärt. Die physiologische Proteinurie verschwindet am 4-10. Tag nach der Geburt (bei Frühgeborenen später). Die Proteinmenge ist gering. Es ist ein Nukleoalbumin.

Neonatale Albuminurie, die lange Zeit andauert, kann ein Symptom für angeborene Lues sein.

2. Schlaganfall Albuminurie. Sie werden durch Überschreiten der Schwelle der normalen Reizbarkeit des Nierenfilters durch erhebliche mechanische, thermische, chemische, psychische und andere Reizungen verursacht - Flüssigkeitsverlust bei Säuglingen (Dehydrationsproteinurie), kaltes Baden, reichhaltige proteinreiche Nahrung (alimentäre Proteinurie), Nierenpalpation (palpatorische Albuminurie). körperlich überarbeitet, Angst usw.

Eine Schlaganfall-Albuminurie tritt bei Kindern im Kindesalter leichter auf als bei älteren Kindern und bei Erwachsenen, da die Nieren eines Säuglings und eines Kleinkindes leichter gereizt werden. Dehydratisierungsalbuminurie (Fütterungsstörung, Hydrolyse, Toxikose, Durchfall, Erbrechen) tritt besonders häufig bei Säuglingen auf.

Schlaganfall Albuminurie ist gutartig. Sie verschwinden sofort nach der Beseitigung ihrer Ursachen. Gelegentlich finden sich im Sediment Leukozyten, Zylinder und rote Blutkörperchen. Protein ist meistens ein Nukleoalbumin.

3. Orthostatische Proteinurie. Dieser Zustand ist für Kinder im Vorschul- und Schulalter charakteristisch. Sie tritt aufgrund von vasomotorischen Störungen in der Blutversorgung der Niere auf. Typisch für die orthostatische Albuminurie (daher der Name) ist, dass sie nur erscheint, wenn das Kind steht, wenn sich die Wirbelsäule in einer Lordose befindet. In Rückenlage verschwindet es. Das Nukleoalbumin wird freigesetzt. In Zweifelsfällen können Sie auf eine orthostatische Erfahrung zurückgreifen, die sich wie folgt zusammensetzt: Abends, eine Stunde vor dem Hinlegen, leert das Kind die Blase; Am Morgen beim Aufstehen gibt er wieder Urin frei. Dieser Urin enthält kein Protein. Dann wird das Kind für 15-30 Minuten mit einem Stock hinter seinem Rücken auf die Knie gesetzt, zwischen den Ellbogen beider Hände gebeugt. Es schafft eine Position der Lordose, die zur Freisetzung von Eiweiß führt, ohne dass sich das Sediment verändert.

Bei einer orthostatischen Albuminurie können pro Tag 8–10 g Protein freigesetzt werden.

Organische Nierenproteinurie ist von großer klinischer Bedeutung zwischen allen Proteinurien. Sie werden durch organische Nierenerkrankungen (Nephritis, Nephrose, Nephrosklerose) verursacht. Proteinurie ist eines der wichtigsten und bekanntesten Symptome einer organischen Nierenerkrankung.

1. Bei akuter und chronischer Glomerulonephritis tritt regelmäßig eine Proteinurie auf. Die Proteinmenge ist moderat und es gibt keine Parallele zwischen dem Grad der Proteinurie und dem Schweregrad der Erkrankung. Im Gegensatz dazu treten chronische und schwerere Jade häufig mit geringeren Proteinmengen auf als akut. Nach akuter Nephritis bilden sich manchmal über längere Zeit (Jahre) geringe Proteinmengen im Urin ab, die keine pathologische Bedeutung haben ("Restalbuminurie"). Es darf nicht vergessen werden, dass auch „Nephritis ohne Proteinurie“ auftreten kann. Manchmal wird Protein in einer Portion Urin gefunden und in einer anderen nicht. Das Verhältnis von Albumin zu Globulinen ist bei akuter Nephritis gering und bei chronischer Nephritis höher.

2. Im Falle der Nephrosklerose ist die Menge an Proteinen im Urin unbedeutend, die Krankheitsformen ohne Protein im Urin werden häufig gefunden.

3. Bei allen Nierenerkrankungen tritt die Nephrose mit der stärksten Proteinurie auf.

4. Bei infektiösen und toxischen Zuständen werden die sogenannte fieberhafte und toxische Proteinurie gefunden. Dies sind akute Nephrosen, bei denen die Proteinmenge gering ist. Diese Gruppe umfasst auch Proteinurie in krampfartigen Zuständen (Konvulsionen), Hyperthyreose, Gelbsucht, Invaginationen, Enterokolitis, Verbrennungen, schwere Anämie usw. Diese Albuminurie ist gutartig und geht schnell vor (vorübergehende Albuminurie).

5. Wenn das Blut in den Nieren stagniert, tritt die sogenannte stauende Albuminurie auf, die für Herz-Kreislauf-Patienten im Stadium der Dekompensation charakteristisch ist. Es ist auch in Aszites und Tumoren des Bauches gefunden.

Bei fieberhafter, toxischer und stauender Albuminurie ist die erhöhte Permeabilität des Nierenfilters besonders ausgeprägt. Einige Autoren berichten, dass viele dieser Proteinurie ohne organische Schädigung des Nierenparenchyms auftreten.

Extrarenale Albuminurie wird in der Regel durch Proteinverunreinigungen (Sekretionen, abgebrochene Zellen) verursacht, die vom erkrankten Harntrakt und den Geschlechtsorganen ausgeschieden werden. Häufig findet sich eine extrarenale Albuminurie aufgrund einer Cystopielitis (Pyurie), seltener aufgrund von Vulvovaginitis, Zahnstein und Tumoren der Harnwege.

Bei extrarenaler Albuminurie im Sediment finden sich eine Vielzahl von Leukozyten und Bakterien. Renale Elemente kommen fast nie vor. Die Proteinmenge ist gering. Gefilterter oder zentrifugierter Urin ergibt normalerweise keine positive Proteinprobe.

Bei Menschen, die sich von einer Pyelitis erholen, verschwindet die Albuminurie nach Bakteriurie und Pyurie.

Als charakteristisches Phänomen sollte hervorgehoben werden, dass organische Nierenerkrankungen im frühen Kindesalter extrem selten sind. Daher ist auch organische Proteinurie selten. Von ihnen werden hauptsächlich Fieber und Giftstoffe gefunden. Im Gegensatz zu organischer Proteinurie ist Schlaganfall-Albuminurie bei Kleinkindern sehr häufig.

Bei älteren Kindern ist die organische Proteinurie häufiger funktionsfähig. Im Allgemeinen ist funktionelle Proteinurie mit zunehmendem Alter seltener und öfter organisch.

Elektrophoretische Untersuchungen von Proteinen im Urin

Eine Reihe von Autoren verwenden die elektrophoretische Methode zur Untersuchung von Proteinen im Urin (Uroproteine). Aus dem erhaltenen Elektrophoregramm geht hervor, dass sie dieselbe qualitative Zusammensetzung wie Plasmaproteine ​​haben. Dies zeigt an, dass Proteine ​​im Urin von Plasmaproteinen stammen.

Qualitative und quantitative Proteinbestimmung im Urin.

Normalwerte: Normales Protein im Urin ist in minimalen Mengen enthalten, die von den üblichen qualitativen Reaktionen nicht erkannt werden. Die Obergrenze der Proteinnorm im Urin liegt bei 0,033 g / l. Ist der Proteingehalt höher als dieser Wert, werden hochwertige Proteinproben positiv.

Die klinische Bedeutung der Definition:

Das Auftreten von Protein im Urin wird als Proteinurie bezeichnet. Proteinurie kann falsch und renal sein. Extrarenale Proteinurie kann in Gegenwart von Proteinverunreinigungen aus den Genitalorganen (Vaginitis, Urethritis usw.) auftreten, während die Proteinmenge unbedeutend ist - bis zu 0,01 g / l. Renale Proteinurie kann funktionell (mit Hypothermie, körperlicher Anstrengung, Fieber) und organisch sein - mit Glomerulonephritis, Pyelonephritis, Nephritis, Nephrose, Nierenversagen. Bei einer Nierenproteinurie kann der Proteingehalt 0,033 bis 10-15 g / l betragen, manchmal höher.

Das Prinzip der Methode: beruht auf der Tatsache, dass Protein unter der Wirkung anorganischer Säuren koaguliert (sichtbar wird). Der Trübungsgrad hängt von der Proteinmenge ab.

Nachweis von Eiweiß im Urin mit 20% Sulfosalicylsäure.

Reagenzien: 20% ige Lösung von Sulfosalicylsäure. Ausrüstung: dunkler Hintergrund.

1. Anforderungen an den Urin: Der Urin muss einen sauren (oder leicht sauren) pH-Wert aufweisen, muss transparent sein, zu diesem Zweck wird der Urin zentrifugiert. Der alkalische Urin wird unter Verwendung von Indikatorpapier zur Kontrolle zu einem schwach sauren Reaktionsmedium angesäuert.

2. In 2 Reagenzgläser gleichen Durchmessers 2 ml vorbereiteten Harn gießen. 1 Reagenzglas - Kontrolle, 2 - Erfahrung. In das Reagenzglas 4 Tropfen 20% Sulfosalicylsäure geben.

3. Das Ergebnis ist dunkel hinterlegt.

4. In Gegenwart von Protein trübt sich der Urin im Reagenzglas.

Hochwertige Proteinbestimmung im Urin durch Teststreifen.

Zur Identifizierung von Proteinurie werden verschiedene Monoteststreifen verwendet: Albufan, Albustiks, Biofan E und politische Tests: Triscan, Nonafan und andere.

Nachweis von Protein im Urin nach der Methode von Roberts-Stolnikov.

Das Prinzip der Methode: beruht auf der Tatsache, dass Protein unter der Wirkung anorganischer Säuren koaguliert (sichtbar wird). Der Trübungsgrad hängt von der Proteinmenge ab (d. H. Dem Geller-Ring-Test). Wenn die Proteinkonzentration im Urin 0,033 g / l beträgt, erscheint am Ende von 3 Minuten nach der Urinschichtung ein dünner weißer Faden.

Reagenzien: 50% ige Salpetersäurelösung oder Roberts-Reagenz (98 Teile einer gesättigten Natriumchloridlösung und 2 Teile konzentrierte Salzsäure) oder ein Reagens von Larioninsäure (98 Teile einer gesättigten Natriumchloridlösung und 2 Teile konzentrierte Salpetersäure).

Ausrüstung: dunkler Hintergrund.

1. Anforderungen an den Urin: Der Urin muss einen sauren (oder leicht sauren) pH-Wert aufweisen, muss transparent sein, zu diesem Zweck wird der Urin zentrifugiert. Der alkalische Urin wird unter Verwendung von Indikatorpapier zur Kontrolle zu einem schwach sauren Reaktionsmedium angesäuert.

2. 2 ml einer 50% igen Salpetersäurelösung oder eines der Reagenzien in ein Reagenzglas geben, dann vorsichtig mit einer Pipette das gleiche Volumen des vorbereiteten Urins entlang der Röhrchenwand gießen.

3. Probe wird 3 Minuten lang gelassen

4. Nach 3 Minuten das Ergebnis melden. Das Ergebnis ist im Durchlicht auf einem dunklen Hintergrund markiert. Wenn der Ring breit und kompakt ist, wird der Urin mit destilliertem Wasser verdünnt und erneut mit dem Reagenz überschichtet.

5. Der Urin wird verdünnt, bis sich nach 3 Minuten ein dünner Filamentring gebildet hat.

6. Die Berechnung des Proteingehalts im Urin erfolgt nach der Formel:

C = 0,033 g / l · Verdünnungsgrad.

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Methodische Entwicklung von praktischen Kursen "Proteinbestimmung im Urin" (1 Kurs)

Capital Training Center
Moskau

Thema: Bestimmung des Urinproteins.

Ziel: Untersuchung der chemischen Eigenschaften von Urin.

Untersuchung der quantitativen und qualitativen Methoden zur Bestimmung des Urinproteins;

Lernen Sie die Grundlagen der Arbeit mit Teststreifen an automatischen Analysegeräten.

Beschäftigungsart: praktisch (6 Stunden)

Der Schüler sollte wissen:

Qualitative Proben zur Proteinbestimmung.

Roberts-Stolnikov-Methode.

Bestimmung von Protein 3% SSC.

Biuret-Methode zur Proteinbestimmung (THU).

Der diagnostische Wert von Forschungsindikatoren.

Der Student sollte in der Lage sein:

Bereiten Sie einen Arbeitsplatz für die Urintestung vor.

Bereiten Sie Reagenzien, Geschirr und Ausrüstung für die Studie vor.

Bestimmung der chemischen Eigenschaften des Urins (Protein im Urin durch qualitative und quantitative Methoden).

Arbeiten mit leeren Produkten (Entwurf von Analyseformularen).

Interpretieren Sie die Ergebnisse der Studie richtig.

Mittel, um das Ziel zu erreichen:

1. Arbeit mit Notizen, pädagogischer und spezieller Literatur.

2. Vorbereitung auf praktische Übungen anhand der methodischen Empfehlungen des Lehrers, Durchführung und Durchführung der praktischen Arbeit.

3. Arbeit mit informativen Bildungsmitteln in elektronischen Medien und Papiermedien.

Ausrüstung für Arbeitszimmer und Büroarbeitsplätze:

Plätze nach der Anzahl der Schüler;

Lehrer am Arbeitsplatz;

Spezialmöbel und -ausrüstung.

Technische Schulungsinstrumente:

Computer zur Ausstattung des Arbeitsplatzes des Lehrers und der Schüler;

technische Geräte zur audiovisuellen Anzeige von Informationen;

Audiovisuelle Lehrmittel (Präsentation, Schulungsvideo).

Die Lektion beherrscht das Ergebnis:

Ausbildung von praktischen beruflichen Fähigkeiten und ersten praktischen Erfahrungen, einschließlich beruflicher (PC) und allgemeiner (QS) Kompetenzen:

PC 1.1. Bereiten Sie einen Arbeitsplatz für klinische Laborversuche vor.

PC 1.2. Durchführung klinischer Laborstudien mit biologischen Materialien.

PC 1.3. Notieren Sie die Ergebnisse der Forschung.

PC 1.4. Altes Material entsorgen, gebrauchte Glaswaren, Werkzeuge und Schutzausrüstung desinfizieren und sterilisieren.

OK 1. Verstehen Sie die Natur und die soziale Bedeutung ihres zukünftigen Berufes und zeigen Sie ein stetiges Interesse daran.

OK 2. Organisieren Sie Ihre eigenen Aktivitäten, wählen Sie Standardmethoden und -methoden für professionelle Aufgaben, bewerten Sie deren Wirksamkeit und Qualität.

OK 6. Arbeiten Sie in einem Team und einem Team, kommunizieren Sie effektiv mit Kollegen, Management und Patienten.

OK 9. In den Bedingungen des Technologiewechsels in der beruflichen Tätigkeit geleitet zu werden.

OK 13. Organisation eines Arbeitsplatzes unter Beachtung der Anforderungen des Arbeitsschutzes, der Arbeitshygiene, der Infektiosität und der Brandsicherheit.

Ich modul Der theoretische Teil mit den Elementen der selbständigen Arbeit

Aufgabennummer 1. Studieren und skizzieren Sie Lernmaterial in Arbeitsmappen.

Ein gesunder Mensch enthält normalerweise weniger als 0,002 g / l und selten bis zu 0,012 g / l Protein. Normalerweise wird dieser Urin-Proteingehalt als "in Form von Spuren" bezeichnet und mit herkömmlichen chemischen Methoden im gesunden menschlichen Urin nicht nachgewiesen.

Der Proteingehalt in zu verschiedenen Tageszeiten gesammelten Harnanteilen kann erheblich variieren.

Protein im Urin wird als Proteinurie bezeichnet.

In Abhängigkeit vom täglichen Proteinverlust werden folgende Grade der Proteinurie unterschieden: mäßig bis 1 g; mittel - von 1 bis 3 g; ausgesprochen - mehr als 3 g.

Es gibt zwei Hauptarten von Proteinurie:

Proteinurie, verursacht durch Erkrankungen des Harnwegs;

Proteinurie, mit Läsionen (Erkrankungen) der Nieren.

Proteinurie im Zusammenhang mit entzündlichen Prozessen des Harntraktes, begleitet von dem Auftreten einer signifikanten Anzahl von Leukozyten oder Erythrozyten im Urin, was jedoch den gleichzeitigen Eintritt von Protein in den Urin aus dem Nierenparenchym nicht beseitigt; Der Proteingehalt überschreitet selten 1 g / l.

Renale Proteinurie ist in den meisten Fällen mit einer erhöhten Permeabilität von Glomeruli assoziiert und wird in 2 Gruppen unterteilt:

Zur physiologischen Proteinurie gehören Fälle des vorübergehenden Auftretens von Protein im Urin, die nicht mit Erkrankungen in Verbindung stehen:

nach dem Verzehr einer großen Menge von Lebensmitteln, die reich an nicht denaturierten Proteinen (rohes Fleisch, rohe Eier) sind;

bei intensiver Muskelarbeit (lange Wanderungen, Sportveranstaltungen);

wenn Sie ein kaltes Bad oder eine Dusche nehmen;

mit starken emotionalen Erfahrungen;

mit epileptischen Anfällen.

Unterscheiden Sie die orthostatische oder jugendliche Proteinurie, die bei Kindern und Jugendlichen auftritt und im Alter vergeht. In der differentialdiagnostischen Beziehung ist es von praktischer Bedeutung, dass die orthostatische Albuminurie häufig im Zeitraum der Genesung nach einer akuten Glomerulonephritis auftritt.

Pathologische Nierenproteinurie kann das Ergebnis organischer Erkrankungen der Nieren und anderer Organe und Systeme sein: akute Glomerulonephritis; chronische Glomerulonephritis; akute Pyelonephritis; chronische Pyelonephritis; Nephropathie schwangerer Frauen; verschiedene mit Fieber in Verbindung stehende Krankheiten; schwere chronische Herzinsuffizienz; und milde Nierenerkrankung; Lipoidnephrose; Nierentuberkulose; hämorrhagisches Fieber; hämorrhagische Vaskulitis; schwere Anämie; Hypertonie usw.

Aufgabennummer 2. Schreibe und zeichne Diagramme von Labormethoden zur Bestimmung des Proteins im Urin.

Labormethoden zur Bestimmung von Eiweiß im Urin

Es gibt qualitative und quantitative Methoden zur Bestimmung des Proteins im Urin, sie basieren auf der Gerinnung des Proteins im Urinvolumen oder an der Mediengrenze (Urin und Säure); während der Koagulationsgrad gemessen wird, wird die Probe quantitativ.

Probe mit 20% Sulfosalicylsäure (standardisiert);

Geller-Ringprüfung (derzeit nicht verwendet);

Proteinnachweis mit Indikatorpapier (Streifen) und Teststreifen.

die einheitliche Brandberg-Roberts-Stolnikov-Methode;

mit 3% Sulfosalicylsäure.

Qualitative Methoden zur Bestimmung von Eiweiß im Urin

Aufgabennummer 3. Proteinbestimmung im Urin mit einer standardisierten Probe mit 20% Sulfosalicylsäure

Das Prinzip der Methode: basierend auf der Koagulation von Protein im Urinvolumen oder an der Grenzfläche (Urin und Säure)

Geschirr, Ausrüstung und Reagenzien:

20% Sulfosalicylsäure (2-Hydroxy-5-sulfobenzoesäure C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml gefilterter Urin

2 Stück chemische Reagenzgläser

Drei Röhrchen mit filtriertem Urin werden in zwei Röhrchen eingeführt, einem von ihnen werden 6-8 Tropfen Sulfosalicylsäure zugesetzt (erfahren). Auf dunklem Hintergrund werden beide Röhren verglichen.

Interpretation der Ergebnisse:

Eine Trübung im Reagenzglas zeigt das Vorhandensein von Protein im Urin an - die Probe ist positiv.

Hinweis Der alkalische Urin wird vor dem Test durch Zugabe einiger Tropfen 10% iger Essigsäurelösung angesäuert.

Aufgabennummer 4. Proteinbestimmung mit dem Geller-Ring-Test

Das Prinzip der Methode: Die Ringprobe beruht auf der Tatsache, dass bei Zugabe von Salpetersäure zu Urin an der Grenzfläche (Säure - Urin) in Gegenwart von Eiweiß gerinnt und ein weißer Ring entsteht.

Geschirr, Ausrüstung und Reagenzien:

- Reagenzien: 30% ige Lösung von Salpetersäure (HNO 3) (d = 1,2) oder Laryonic Reaktant: 20–30 g Natriumchlorid (NaCl), gelöst in 100 ml destilliertem Wasser, wenn erhitzt, gekühlt, filtriert wird; 99 ml des Filtrats werden mit 1 ml konzentrierter HNO 3 versetzt.

In das Röhrchen 1 - 2 ml einer 30% igen Lösung von HNO 3 oder Larionova-Reagenz geben und die gleiche Menge an filtriertem Urin vorsichtig auf die Wand schichten.

Interpretation der Ergebnisse:

Das Auftreten eines dünnen weißen Rings am Rand zweier Flüssigkeiten zwischen der 2. und 3. Minute zeigt das Vorhandensein von Protein im Urin an.

Zeichnen Sie ein Schema zur Bestimmung des Proteins

Proteinquantifizierung

Das Prinzip der Methode: Die Geller-Ringprobe beruht auf der Tatsache, dass, wenn Salpetersäure an der Grenzfläche (Säure-Urin) in Gegenwart von Protein dem Urin zugesetzt wird, dieser gerinnt und ein weißer Ring erscheint.

Geschirr, Ausrüstung und Reagenzien:

Biologische Flüssigkeit (Urin);

In das Röhrchen 1 - 2 ml einer 30% igen Lösung von HNO 3 oder Larionova-Reagenz geben und die gleiche Menge an filtriertem Urin vorsichtig auf die Wand schichten.

Interpretation der Ergebnisse:

Das Auftreten an der Grenze zweier Flüssigkeiten zwischen der 2. und 3. Minute
Ein dünner weißer Ring zeigt das Vorhandensein von Protein in einer Konzentration von etwa 0,033 g / l an. Wenn ein Ring früher als 2 Minuten nach der Laminierung erscheint, sollte der Urin mit destilliertem Wasser verdünnt und mit verdünntem Urin erneut getestet werden. Der Verdünnungsgrad des Urins wird in Abhängigkeit von der Art des Rings, seiner Breite, der Kompaktheit und der Erscheinungszeit ausgewählt.

Mit einem fadenförmigen Ring, der früher 2 Minuten auftrat, wird der Urin 2-fach verdünnt, mit einem breiten 4-fach, mit einem kompakten 1-8-mal usw. Die Proteinkonzentration wird berechnet, indem die Verdünnung mit 0,033 g / l multipliziert wird.

Ein weißer Ring kann sich bilden, wenn viele Urate vorhanden sind. Im Gegensatz zu Protein erscheint es leicht über der Grenze zweier Flüssigkeiten und löst sich auf, wenn es leicht erhitzt wird.

Aufgabennummer 6. Bestimmung der Proteinmenge im Urin mit 3% Sulfosalicylsäure

Das Prinzip der Methode: Die Proteinkonzentration im Urin ist proportional zur Trübung, die bei der Koagulation von Sulfosalicylsäure auftritt

Geschirr, Ausrüstung und Reagenzien:

0,9% ige Natriumchloridlösung;

1% ige Albumin-Standardlösung - 1 g lyophilisiertes Albumin (aus menschlichem oder Rinderserum) wird in einer kleinen Menge 0,9% iger NaCl-Lösung in einem Kolben mit einem Fassungsvermögen von 100 ml gelöst und dann mit demselben Lösungsmittel bis zur Marke aufgefüllt. Das Reagenz wird durch Zugabe von 1 ml 5% iger Natriumazidlösung (NaN 3) stabilisiert. Bei Lagerung im Kühlschrank ist das Reagenz 2 Monate haltbar.

1,25 ml filtrierter Urin werden in ein Reagenzglas gegeben, 3,75 ml einer 3% igen Sulfosalicylsäurelösung werden zugegeben und gemischt. Nach 5 Minuten wird die Probe auf einer PEC bei einer Wellenlänge von 590–650 nm (Orangen- oder Rotlichtfilter) gegen die Kontrolle in einer Küvette mit einer optischen Weglänge von 5 mm photomettiert. Die Kontrolle dient als Probe, bei der 3,75 ml einer 0,9% igen Natriumchloridlösung zu 1,25 ml Urin gegeben werden. Die Proteinkonzentration wird nach einer Kalibrierungskurve berechnet, für deren Herstellung Verdünnungen einer Standardalbuminlösung hergestellt werden. (siehe Tabelle). Aus jeder erhaltenen verdünnten Lösung werden 1,25 ml entnommen und als Versuchsproben behandelt.

Vorbereitung der Verdünnungen für die Auftragskalibrierung

Standardlösung, ml

0,9% ige Natriumchloridlösung, ml

Proteinkonzentration, g / l

Die geradlinige Abhängigkeit der Extinktionsgröße und der Proteinkonzentration wird bis zu 1 g / l aufrechterhalten. Bei höheren Proteinkonzentrationen sollte die Probe verdünnt werden und die Verdünnung bei der Berechnung berücksichtigen.

Wenn im Urin Substanzen enthalten sind, die Jod enthalten, können falsch positive Ergebnisse erzielt werden. Daher kann der Test nicht bei Patienten angewendet werden, die Jodpräparate einnehmen oder die Forschung mit Jod enthaltenden strahlenundurchlässigen Verbindungen durchgeführt haben. Falsch positive J-Reaktionen während der Studie können durch die Einnahme von Sulfanilamid-Medikamenten, hohen Penicillin-Dosen und bei hohen Konzentrationen im Harn von Harnsäure verursacht werden.

Zeichnen Sie ein Schema zur Bestimmung des Proteins

Aufgabennummer 7. Bens-Jones-Nachweis im Urin

Das Prinzip der Methode: basierend auf der Reaktion der Thermopräzipitation

Geschirr, Ausrüstung und Reagenzien:

Reagenz: 2 M Acetatpuffer pH 4,9.

4 ml filtrierter Urin werden mit 1 ml Pufferlösung versetzt und 15 Minuten im Wasserbad auf 56 ° C erhitzt.

Interpretation der Ergebnisse:

In Gegenwart von Bens-Jones-Protein im Urin tritt in den ersten 2 Minuten ein ausgeprägtes Sediment auf.

Wenn die Proteinkonzentration weniger als 3 g / l beträgt, kann die Probe negativ sein, was ziemlich selten ist, da die Konzentration des Bens-Jones-Proteins im Urin normalerweise sehr hoch ist.

Der zuverlässigste Nachweis des Bens-Jones-Proteins erfolgt durch Ausfällung bei einer Temperatur von 40 bis 60 ° C. Bei zu saurem (pH-Wert unter 3,0) oder zu alkalischem (pH-Wert über 6,5) mit niedriger relativer Urindichte und niedriger Konzentration an Bens-Jones-Beige (weniger als 3 g / l) tritt jedoch keine Sedimentation auf.

Zeichnen Sie ein Schema zur Bestimmung des Proteins

II Modul. Selbstständige Arbeit mit der Forschungsphase

Aufgabennummer 1. Studie und Beschreibung der Anwendung №1 "Proteinnachweis mit diagnostischen Teststreifen"

- Besorgen Sie sich vom Lehrer Proben der biologischen Flüssigkeit (Urin), nummerieren Sie die Proben.

- Führen Sie einen Urintest mit diagnostischen Teststreifen durch.

- Bewerten Sie das Ergebnis (Norm, Pathologie). Angenommen, die Ursache des Proteins im Urin.

- Schreiben Sie das Ergebnis in die Analyseformulare und übergeben Sie sie dem Lehrer.

Proteinnachweis mit diagnostischen Teststreifen

Prinzip Protein ändert die Farbe des auf den Streifen aufgebrachten Indikators. Die Indikatoren sind in einem Satz von 100 Streifen verpackt, die in einem fest verschlossenen Federmäppchen an einem kühlen und trockenen Ort aufbewahrt werden.

Regeln für das Arbeiten mit diagnostischen Teststreifen

Wenn Sie mit diagnostischen Teststreifen arbeiten, müssen Sie die folgenden Regeln beachten:

- Bewahren Sie die diagnostischen Teststreifen in fest verschlossenen Kanisterpackungen auf.

- Lagern Sie die Gehäuse an einem dunklen, trockenen und kühlen Ort bei einer Temperatur von nicht mehr als 30 ° C, jedoch nicht im Kühlschrank.

- Setzen Sie die Streifen keiner Feuchtigkeit und direktem Sonnenlicht, hohen Temperaturen und flüchtigen Chemikalien aus.

- Holen Sie sich nur die unbedingt notwendige Anzahl von Streifen und schließen Sie das Gehäuse dann sofort.

- Berühren Sie die Diagnosezonen nicht mit Ihren Fingern.

Testregeln

1. Verwenden Sie für die Studie Morgenurin, der in einem Einweg-Kunststoff-Urinbehälter gesammelt wurde (oder trockenes Geschirr reinigen). Mischen Sie den gelieferten Urin, aber zentrifugieren Sie nicht.

Bei Verwendung von nicht dem Standard angepassten Verpackungen führen Reinigungsmittelrückstände im Urinauffangbehälter zu falschen Ergebnissen.

2. Nehmen Sie aus dem Federmäppchen einen Teststreifen.

3. Schließen Sie das Gehäuse sofort mit dem Fabrikdeckel, schützen Sie den Streifen vor Feuchtigkeit.

4. Legen Sie die Indikatorpapierstreifen 2-3 Sekunden lang in den untersuchten Urin und entfernen Sie sie sofort.

5. Um überschüssige Feuchtigkeit aus den Diagnosezonen des Streifens zu entfernen, führen Sie ihn mit einer langen Kante entlang der Kante des Behälters (oder eines anderen Behälters, in dem Urin abgegeben wird) oder befestigen Sie diese Kante des Streifens am Filterpapier.

Es ist nicht möglich, überschüssigen Urin aus den Diagnosezonen abzuwaschen.

6. Nach Ablauf der auf dem Etikett des Behälters oder in den Anweisungen für jeden Test angegebenen Zeit, vergleichen Sie die Farbe des entsprechenden Diagnosebereichs mit der Farbskala auf dem Etikett des Behälters mit Streifen (Standard). Das Testverfahren ist in den Abbildungen 1-7 dargestellt.

7. Die Reaktion wird als positiv oder negativ bewertet. Oder in Zahlen ausgedrückt in g / l. (Siehe Zeichnung №8).